1：复苏后首代死细胞过多。原代，系虽然问题特点有差别，量化应用统计目的高细胞活率目的一致，推荐含血清方案DMSO,5-10%+FBS,40-90%,程序降温泡沫盒+棉花包裹后，每分钟梯度降温0.4-0.6度，天然高质量胎牛在零-负二十度程序降温对细胞保护明显，临床组原代免疫细胞活率大于90%,建议上述方法加入种子库级别试剂评测，建议与血替产品差别评价方法推荐。种子库，临床免疫细胞原代，各种难养系系验证较准确。验证预实验结果为准并长时间评测。
2：痛点成团成片，团聚类：难养系，原代，肝类，胰岛胰腺类，腺类，神经类，免疫类，耐药株，SV40,上皮类，都有易成团成片特性，这类细胞还推荐上清回输方法作为辅助救治细胞培养条件（难养系，原代，免疫类系原代，乳腺，前列腺,胶质类），也是无血清容易出现的状态，
3：二甲基亚砜敏感，解冻后应立即去除冷冻保护剂，在9-10毫升完整的完全培养基溶液中进行缓慢离心（125×g，10分钟）特别是难养系都建议不增殖情况下。
冻存复苏挑剔参考
耐药株建立后高活率要求细工备份方案
原代免疫-临床研究高活率细工方案优势
原代自建系保种
二倍体细胞系
工业案例马利克疫苗-对冻存复苏技术
种子库应用需长时间反复验证，备份组预验证，其他特殊目的或更多优化方法可讨论
上述有开发冻存复苏自动化用户组，温控可检测0.4-0.6的厂家可留言，统计讨论应用中问题。
冻存复苏后培养过程中死细胞伴随推荐备份方案
1：常见问题，因增殖慢，习惯培养长时间少动（容易导致细胞质量老幼并存，冻存复苏后死细胞过多，转染后死细胞过多也是同理）建议小克隆形成后及时消化成单个后铺板传代，该步预实验验证后，转染，冻存复苏首代死细胞问题都有明显改善，
2： 优化胰酶，对细胞膜无损，上述难养类保证细胞膜完整也是培养重要组成部分，并胰酶敏感类都有多年统计案例与应用。无血清方案因子营养耗尽影响状态及问题，建议含血清先行验证。
3：避免老幼并存，种子库更新推荐细工简易单克隆法是个不错的方法，延展应用，原代单细胞研究，单克隆目的细胞，
4：系应用目的推荐，离体处理推荐无外力（机械，化学），简易单克隆后，大量培养培养后在做流式鉴定，避免化学力影响增殖，含血清培养可行性高（黑点，生长慢）都可用含血清方案作为备份方案。大部分类器官无血清方案都有这类问题，含血清有提升细胞质量，并修复，预实验备份验证先行。适合类器官黑点，生长慢作为补充条件一，条件二推荐上清回输培养。